情欲禁地 Fmoc保护氨基酸与Wang树脂的缩合反映_合成_成果_mmol
纲目：接洽了保护氨基酸、Wang树脂取代度、树脂粒度、搅动表情对Fmoc-氨基酸-Wang树脂联络成果的影响.适度标明， 保护氨基酸分子量的大小会因产生不同的位阻而影响缩合反映的成果， 分子量越小缩合成果越高;Wang树脂的取代度较高时， 已缩合的氨基酸给后续保护氨基酸的缩合形成退却， 使缩合成果镌汰;粒径较小和搅动较好时， 对保护氨基酸的粒表里扩散故意， 可培育反映速率和缩合成果.
关节词： 固相多肽合成 Wang树脂 Fmoc保护氨基酸 活化酯法
自从20世纪60年代， Merrifield解释 [1] 发明固相多肽合成以来， 经过40多年的发展， 固相多肽合成还是发展成为多肽化合物制备的蹙迫妙技 [2] ， 何况还是大边界地用于多肽类药物的工业化分娩. 在固相多肽合成中， 所用氨基酸的N-端保护有叔丁氧羰基 (Boc) 和芴甲氧羰基 (Fmoc) 两种战略.在Boc战略中， 合成经过需要经常使用三氟乙酸 (TFA) 进行脱保护， 终末将肽从载体树脂上裂解下来也需使用氟化氢 (HF) 气体， 操作未便 [3] ; 而Fmoc战略中， 合成经过顶用蔼然的有机碱 (六氢吡啶) 进行脱保护， 终末肽的裂解仅需使用一次三氟乙酸 (TFA) 溶液， 操作方便 [4] .
张开剩余83%选拔这两种战略合成的肽从纯度和收率比较并无太大离别 [5] ， 是以选拔Fmoc战略进行肽合成获得越来越平淡地利用.
Fmoc选拔战略合成的第一步是将一个Fmoc保护的氨基酸的羧基通过酯键或酰胺键联络到载体树脂上， 这一步联络成果的高下不仅奏凯影响到后头氨基酸的用量， 也奏凯影响到经营肽的收率. 因此， 在固相多肽合成中， 第一步联络成果的接洽杰出蹙迫.
本接洽选拔N， N-二异丙基碳二亚胺 (DIC) 代替常用的二环己基碳二亚胺 (DCC) ， 因为前者在反映中形成的脲盐副家具融解性比后者要好， 较容易洗除 [6] . 尽管二甲基甲酰胺 (DMF) 对Fmoc-氨基酸和缩合试剂均具有融解度高的优点 [7] ， 然而DMF对选拔DIC与二甲氨基吡啶 (DMAP) 催化的羟基树脂与Fmoc氨基酸的成酯反映有扼制作用， 而二氯甲烷 (DCM) 在成酯反映中对DIC-DMAP催化的反映系统则是致密的溶剂 [8] ，故此， 本接洽选拔DCM为溶剂， 以平淡使用的Wang树脂 [9] 动作固投合成载体， 用活化酯法进行Fmoc保护氨基酸与树脂的缩合反映 (Scheme 1) . 探讨了雷同条目下带不同保护基的氨基酸与树脂的缩合反映成果; 还区别探讨了不同的反映条目下， 保护氨基酸的种类、 Wang树脂的取代度、 树脂的粒度、 反映的搅动表情等身分对缩合反映成果的影响.
1 践诺1.1 践诺经过
用DCM预溶胀树脂30 min， 滤去溶剂备用; 将Fmoc-氨基酸 (2.5 mmol) 及HOBt (2.5 mmol) 溶于DCM中， 然后加入DIC (2.5 mmol) ， 搅动10 min; 再加入已溶胀好的Wang 树脂 (1.0 mmol) ， 加入DMAP (0.1 mmol) ， 密封反映容器， 控温25~28 ℃反映15 h. 住手反映， 滤去反映液， 用DMF洗涤树脂2次， 滤去DMF; 纪律加入DCM (溶剂) 、 乙酸酐 (5 mmol) 、 吡啶 (5 mmol) ， 密闭反映容器， 控温25~28 ℃反映1 h， 用DCM洗涤树脂.
1.2 Fmoc-氨基酸联络Wang 树脂的取代度检测
按照Markus Gude等 [10] 的花样进行取代度的检测和狡计.情欲禁地
1.3 树脂缩合反映成果狡计
2 适度与商讨2.1 不同的保护氨基酸对缩合反映成果的影响
4种保护氨基酸与并吞批Wang 树脂 (取代度1.0 mmol/g) 在雷同条目下反映， 适度见表1.
从表1数据可看出， 在所用Wang 树脂和缩合花样雷同期， 缩合反映成果随联络的保护氨基酸分子量的增大而镌汰. 这是因为保护氨基酸的侧链基合营构不同变成的 (Scheme 2) . 侧链基团大小的成列轨则为Arg>Cys>Ser>Gly (无侧链) . 由于Wang 树脂与保护氨基酸的缩合反映口舌均相 (固液两相) 反映， 保护氨基酸侧链基团越大， 它的空间位阻越大， 反映活性就越低， 联络成果越低; 同期保护氨基酸侧链基团越大， 位阻的影响使其在反映经过中向Wang 树脂里面扩散的速率越慢， 干预树脂里面网格与反映基团交游的几率越少， 也会变成联络成果的镌汰.
免费成人电影Scheme 2 Side chain structure of Fmoc-amino acids
2.2 Wang 树脂取代度对缩合反映成果的影响
3批取代度不同的Wang 树脂与3种保护氨基酸在雷同条目下反映， 适度见表2.
从表2数据不错看出， 在与Wang树脂缩合反映经过中， 并吞种保护氨基酸的缩合反映成果随Wang 树脂取代度的增大而镌汰. 这是因为跟着Wang树脂取代度的增大， 树脂在DCM中的溶胀度变小， 树脂里面空间网格变得拥堵， 树脂里面空间反映活性点密度变大， 由于位阻的影响已缩合的氨基酸对树脂内相近的其它反映活性点有掩盖， 给后续保护氨基酸的缩合变成退却， 使缩合成果镌汰.
2.3 搅动表情对缩合反映成果的影响
并吞批Wang 树脂 (取代度1.0 mmol/g) 区别与两种保护氨基酸及选拔两种搅动表情进行反映 (其它反映条目雷同) ， 适度见表3.
从表3数据不错看出， 摇床中的缩合反映成果均低于机械搅动下的缩合反映成果. 原因是摇床搅动力度比机械搅动差. 在固-液两相背应中， 保护氨基酸必须经过膜扩散和粒扩散两个经过才气干预Wang 树脂里面， 与树脂里面的反映基团交游. 搅动的加强不错培育膜扩散速率， 使机械搅动的反映成果比摇床中的更高一些.
2.4 Wang 树脂粒度对缩合反映成果的影响
将2批取代度雷同 (1.0 mmol/g) 、 粒度不同的Wang 树脂区别与两种保护氨基酸在雷同条目下反映， 适度见表4.
从表4数据不错看出， 粒径越小的树脂联络成果越高. 这是因为雷同取代度的Wang树脂， 其粒径越小， 反映物从外到内扩散的旅途越短， 越故意于缩合反映中缩合试剂及保护氨基酸的粒内扩散 [11] 和缩合反映的进行.
3 结 论本接洽适度标明， 雷同条目下不同的保护氨基酸与Wang 树脂的缩合反映成果与保护氨基酸的侧链结构联系， 侧链基团越大反映成果越低; 对并吞种保护氨基酸而言， Wang 树脂的取代度越高， 树脂粒度越大， 缩合反映成果越低; 加强搅动可符合培育缩合反映成果. 由于本接洽选拔了低比例投料量的缩合反映工艺， 主要试剂与Wang 树脂的摩尔比为2.5∶1， 对肽合成分娩的工业化更具有骨子意旨.
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